domingo, marzo 29, 2009

ChIP

Hola de nuevo. Siento haberos dejado tanto tiempo y ya he tenido reproches por ello así que intentaré compensaros en un futuro. Sé que tengo un par de temas pendientes, pero hoy me parece más oportuno contaros un poco sobre la técnica que me tiene tan liada últimamente, la ChIP (inmunoprecipitación de cromatina). Esta técnica se basa en la capacidad que tienen los anticuerpos de reconocer específicamente un tipo de molécula. Los anticuerpos son parte de las defensas de los animales, algunos glóbulos blancos los producen y los anticuerpos se unen a la molécula extraña inutilizandola y marcandola para que actúen el resto de defensas. Cada tipo de anticuerpo reconoce un tipo determinado de molécula, por lo que se utilizan mucho en biología para marcar o detectar ciertas moléculas. Así, por ejemplo, si queremos saber dónde se sitúa una proteína en una célula usamos un anticuerpo contra esa proteína, que además tenga unido una molécula fluorescente y así luego lo podemos ver al microscopio. La ChIP lo que hace es usar los anticuerpos pero de otra manera. La palabra inmunoprecipitación viene de que al ser los anticuerpos parte del sistema inmune también se conocen como inmunoglobulinas, así que ya os podeis imaginar que vamos a usar los anticuerpos para hacer que algo precipite o caiga al fondo. Lo que hacemos es coger todo el ADN de un montón de células, con proteinas y todo (porque el ADN, para ser estable y cumplir sus funciones, está unido a un montón de proteínas). Luego cortamos ese ADN o cromatina en trocitos pequeños y le añadimos el anticuerpo. Las proteínas que estan unidas a las distintas partes del ADN son diferentes según la estructura, función, etc del ADN, de modo que si usamos un anticuerpo contra una proteína asociada con una función concreta marcaremos sólo el ADN que cumpla esa función. En mi caso uso un Anticuerpo contra una proteína que sólo está en el centromero. Cuando ponemos el anticuerpo este reconocerá las proteínas concretas. Luego usamos un producto (carísimo por cierto) que se llama sefarosa y que se une a los anticuerpos. Este producto pesa mucho, de manera que si luego centrifugamos un poco ese producto, junto con el anticuerpo, la proteína a la que reconoce y el ADN unido a ella, van a precipitar al fondo del tubo. Luego se coge este fondo se purifica el ADN y así podemos luego trabajar con él y ver qué hay ahí.

Esta técnica no es muy dificil, pero es un poco liosilla y requiere mucha preparación previa. Por eso me está llevando mi tiempo comprar todo lo necesario para nuestro laboratorio y ponerla a punto. Pero espero que me de buenos resultados y pueda obtener así muchos datos para mi tesis. Como siempre si algo no os queda claro preguntad. He intentado simplificar, pero igual lo he hecho mucho o me he dejado alguna cosilla.

6 comentarios:

Germán dijo...

Muy claro y muy bien explicado por Dios si hasta yo lo he entendido¡¡¡ Lo flipo con la inteligencia de los anticuerpos. ¿¿Esto lo aprendiste en USA o lo llevabas ya de España?? Besossss¡¡¡ Y bienvenida de nuevooo¡¡¡¡

Myriam dijo...

esta es una de las técnicas que aprendí en USA. En España hay gente que la hace pero contra otras proteínas más faciles, y ya que iba...

Natalia dijo...

Holaa!! me encanta tu blogggg!! oye una pregunta...qué estudiastes? que carrera?
El próximo curso voy para la universidad y tengo un cacao mental! aunque creo que haré biología! pero buahhh me encantaría trabajar con cosas como de las que hablas aqui!! bueno espero la respuesta! y gracias :D

Myriam dijo...

Pues sí, hice biología, y me especialicé en genética. Esta especialidad como tal sólo está en la complutense, pero por ahí en otras universidades también hacen cosas parecidas.
Lo malo es que para conseguir una beca hay que tener muy buenas notas y no dormirse en los laureles ni en primero, yo ya te lo aviso...
Muuchas gracias por los halagos al blog, eso me ayuda a seguir estudiando.
besos

Natalia dijo...

Gracias por la información!! por ahora stoy media asustada! porque me han dicho que es dificil la carrera! pero bueno supongo que sera como todas, y que tendre que trabajar duro! espero k me vaya bien!! y poder trabajar en cosas como tu :) y sii me encanta tu blog :)

Esther Andrés dijo...

Me alegro mucho de haber encontrado tu Blog, soy estudiante de Bioquímica y ciencias biomedicas en Valencia y justo tengo un examen de ingeniería genética en el cual me tengo que estudiar la técnica de CHip entre otras tantas de la biología molecular. Me ha quedado más claro el fundamento de esta técnica =) Supongo que esta técnica al final de todo llevara a cabo una PCR para amplificar tu secuencia aislada con la proteína y poder conocer la secuencia a la cual se une. Muchas gracias y me gusta tu Blog!